-Protocol-

核DNA染色法

以下は、いずれも、核DNA量を測定するための濃度です。単なるcounter-stainに使いたいときは、１０−１００倍希釈にしてください。
　　　1) PI  (propidium iodido)：
　　　   0.025-0.05mg/ml in 1.12% Sodium citrate、４℃、３０分

　　　2) DAPI-1 (4’,6-diamidino-2-phenylindole)：
　　　　　　 a) DAPI stock solution; 10 mg/ml in DW (solution 1)
　　　　　　 b) solution 2
　　　　　　　　　Tris-base     1.21145g  (10 mM)
　　　　　　　　　EDTA-2Na   3.7225g   (10 mM)
　　　　　　　　　NaCl        5.844g    (100 mM)
　　　　　　　　　in 1 liter DW
　　　　　　c) 0.5 ml solution 1 + 99.5 ml solution 2
　　　　　　d) add 0.1136 gm 2-mercaptoetylamine hydrochloride

　　　　　　＊簡易版
　　　　　　　　1mlのTBS（or　PBS）に、DAPIと2メルカプトエタノール 1μl（2メルカプトエチ
　　　　　　　　　ルアミンでも可）を、最終的濃度、DAPI=10〜100 ng/ml、2メルカプトエタノー
　　　　　　　　　ル=1% (10-100mM)になるように加える。４℃、６０分
　　　3) Ho (Hoechst 33342) for vital staining
　　　　　　　a) Stock solutoin;  0.001% Ho in DW
　　　　　　　b) Add stock solution to the culture medium (10 ml/10ml)
　　　　　　　　　　　(final concentral= 10-6 %)