-Protocol-

蛍光減衰防止剤

市販のもの
　　ProLong (Molecular Probes) 高価だが効果良好。
　　SlowFade, SlowFade Light (Molecular Probes)
　　FluoroGuard (Bio-rad)
　　PermaFluor(Lipshaw/Immunon; Pittsburgh, Pa, USA)
　　Vectashield(Vector)

自作のもの
１）FITCに対しては高pHのTris-buffered glycerolにPPD(1%)やDABCO(5~10%)を加えたもの。

２）自作減衰防止剤
　　　Ａ液：ポリビニルアルコール（シグマTYPE II）　20g
　　　　　　　１Ｍトリス緩衝液（pH9.0）　　　　　　　5ml
　　　　　　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　10m
　　　　　　　　水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　75ml
　　　Ｂ液：5% DABCO(1,4-diazobicyclo[2.2.2]octane)
　　　Ａ液とＢ液を等量混ぜて、水酸化ナトリウムか塩酸でpH8.7に調製。
　　＊ ポリビニルアルコールのせいか、凍結すると細胞の形態が壊れることが
　　　　あります。
   ＊ 標本を凍結保存する必要がある場合には、緩衝50%グリセリンを基剤と
　　　　するものを使う。
３）自作減衰防止剤　
　　準備するもの
　　　　Glycerol（比重1.25）90ml = 11.25g
　　　　DABCO(1,4-diazobicyclo[2.2.2]octane C6H12N2:FW =112.2
　　　　腐食性、吸湿性！    これが退色防止剤
　　　　PBS(-) (filtrated；0.45μm)　6ml
　　　　pH調整用　1N NaOH
　　　　pH測定器（ex;pHBOY,pH試験紙）
　　　　60℃まで上げられる水槽インキュベーター
　　　　　　プロトコール
　　　2.5g DABCOを100mlマイヤーに入れる
　　　11.25g glycerolを加え、60℃の水槽インキュベーターで温めながら溶かす（溶け
　　 にくいが、がんばる）
　　　6ml PBS(-)を加える
　　　スターラーで混ぜながら1N NaOHを滴下し、pH8.5に合わせる
　　　適当なチューブ(15ml FALCON tubeなど)に分注する。
　　　長期的な保存の時は4℃で。